Мясопептонный бульон мясопептонный бульон

(Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.)

(МПБ) - основная жидкая питательная среда, используемая для выращивания хемоорганотрофных бактерий. Готовят на основе мясной воды или 0,5 - 1% водного р-ра мясного экстракта, добавляя к ним 0,5-1% пептона и 0,5% натрия хлорида. Устанавливают рН 7,4 -7,6. Стерилизуют автоклавированием при 120°С в течение 15- 30 мин. См. Питательные среды бактериологические .

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)

Смотреть что такое "мясопептонный бульон" в других словарях:

- (МПБ) жидкая питательная среда для культивирования микроорганизмов, состоящая из мясной воды и пептона (1 2%); служит основой многих других жидких питательных сред … Большой медицинский словарь

Мясной отвар, питательная среда, применяемая для культивирования микроорганизмов, участвующих в деградации белков. В зависимости от добавок различают, напр., глицериновый Б., нитратный Б., лактозный Б., наибольшее распространение имеет… … Словарь микробиологии

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ - ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, искусственные среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных условиях. Впервые были введены для изолирования отдельных видов бактерий Р. Кохом в 1881 году, что создало… … Большая медицинская энциклопедия

Субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности. Питательные среды различаются по назначению, консистенции и составу. По назначению их… … Медицинская энциклопедия

Питательная среда вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред. Содержание 1 Требования, предъявляемые к средам 2 Классификация … Википедия

Под именем бактерий в науке известны мельчайшие, микроскопической величины организмы, принадлежащие к растительному царству. По своей организации, по своим морфологическим особенностям, Б. ближе всего стоят к так называемым циановым или… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона

Аг антиген АЕ антитоксическая или антигенная единица антибактер. антибактериальный Ат антитело АТФ аденозинтрифосфорная кислота бактер. бактериальный бактериол бактериологический бактериоскоп. бактериоскопический БАС бактерицидная активность… … Словарь микробиологии

К 100 мл мясного бульона добавляют 1 % пептона Пептон- это продукт ферментативного гидролиза белков. Добавляют пептон в среду для увеличения ее питательности, для уплотнения среды в нее добавляют от 2 до 4 % агар-агара

Питательная среда д.б. слабокислой по отношению к цитоплазме микроорганизмов, которые будут выращиваться в ней. Для этого в среду добавляют 0,5% поваренной соли. Реакция среды от 7,0 до 7,4. После введения агар-агара смесь прогревают до неполного студнеобразования.

Приготовление мясо-пептонного желатина.

Эта среда готовится аналогично МПА, но для уплотнения ее применяют на агар-агар, желатин в количестве 10-12% . МПЖ имеет ряд преимуществ перед МПА. Он Лучше соединяется со стеклом, гнилостные бактерии образуют при росте на этой среде весьма характерные колонии, кроме того, некоторые из гнилостных бактерий обладают способностью разжижать желатин, что очень важно для определения вида бактерий. Но МПЖ" плавится при температуре 30-37 0 С, в этом его недостаток.

Дня изучения биохимических признаков микроорганизмов пользуются дифференциально-фагностическими средами. Примером таких сред могут служить среды Гисса. Их применяют для изучения способности м.о. ферментировать углеводы.

В состав сред Гисса входит 1% какого-либо углевода, 1% агар-агара и индикатор. Примером такой среды является и среда Эндо, применяемая для выделения Bact. coli. В состав этой среды входит, кроме МПА, насыщенный спиртовой раствор фуксина, 1% лактозы Na 2 SO 3 , рН 7-7,2 Bact. coli дает на среде Эндо колонии с металлическим блеском. Для изучения плесневых грибов используют среду Сабуро, следующего состава: 1% глюкозы, 1% пептона, 2% агар-агара рН 5-5.6.

ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ:

Приготовить 100 мл МПА:

1. В кастрюлю напивают воду и ставят на горелку - готовят водяную баню.

2. В колбу наливают 100 мл МБ. Взвешивают 2 г. пептона. 0,5 г. агар-агара. Все это помещают в колбу с мясным бульоном.

3. Колбу ставят в кастрюлю с горячей водой и содержимое колбы подогревают до тех пор пока полностью не расплавится агар-агар и среда не станет однородной. Затем добавляют соды (до слабощелочной реакции по лакмусу).

4. Расплавленную среду разливают в пробирки по 10 мл.

5. Готовят ватные пробирки, обтягивают их марлей и закрывают пробки с приготовленной питательной средой.

6. Пробирки с МПА помещают в корзины. Сдают лаборанту для стерилизации.

Классификация питательных сред

По составу питательную среду подразделяют на 2 группы: натуральные среды неопределенного состава и синтетические среды.

Натуральными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный хим. состав. Основой таких сред являются различные части зеленых растений, животные ткани. солод, дрожжи, фрукты, овощи... Большинство из них используется в виде экстрактов или настоев. Однако среды с неопределенным составом малопригодны для изучения физиологии обмена веществ микроорганизмов, поскольку они не позволяют учесть потребление ряда компонентов среды, а с другой стороны выявить, какие вещества образуются по ходу развития м.о. Это связано с тем, что состав натуральных питательных сред очень сложен, кроме того он не является постоянным. Натуральные среды неопределенного состава используются главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления их биомассы и диагностических целей. К числу сред неопределенного состава относят и так называемые среды «полусинтетические». В их состав наряду с известными хим. соединениями входят вещества неопределенного состава Такие среды находят широкое применение в пром. микробиологии для получения аминокислот, витаминов и антибиотиков. В качестве примера таких сред можно назвать: мясопептонная среда, в состав которой одновременно с мясным экстрактом и пептоном входит поваренная соль, фосфорнокислый каши, иногда глюкоза или сахароза, картофельные среды с глюкозой или пептоном.

Синтетические среды - это такие среды в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды могут иметь относительно большой набор компонентов, но могут быть довольно простыми по составу. Синтетические среды наиболее удобны для исследования обмена веществ микроорганизмов. Зная точный состав и количество входящих в среду компонентов, можно изучить их потребление и превращение в соответствующие продукты обмена

По назначению: различают элективные и дифференциально-диагностические среды

Элективные среды обеспечивают развитие преимущественно одного вида м.о. или группы родственных микроорганизмов (менее пригодны или совсем не пригодны для развития других). Такие среды применяют главным образом для выделения.

Микроорганизмов из мест их естественного обитания, для получения накопительных культур.

Дифференциально-диагностические среды : это такие среды, которые позволяют по возможности очень быстро отличить (дифференцировать) одни виды м.о. от других. Их состав подбирается с таким расчётом, чтобы он позволил чётко выявить наиболее характерные свойства данного вида м.о. Нередко это достигается введением в среды специальных красителей-индикаторов.

По физическому состоянию среды разделяют на жидкие, плотные и сыпучие. Для выяснения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, а также для накопления их биомассы или продуктов обмена наиболее удобно применять жидкие среды. Плотные среды используют для выделения чистых культур. В промышленной биологии применяют так называемые сыпучие среды. К ним относятся разваренное пшено, пропитанное питательным раствором.

Вопросы для самоконтроля:

2. Как классифицируют их по агрегатному состоянию?

3. Как делятся питательные среды по назначению? В каких случаях удобнее применять те или иные среды?

4. Какие среды называют дифференциально-диагностическими?

5. Как готовят питательные среды? Какие студнеобразователи чаще всего применяют?

6. Что входит в состав МПА? Как его готовят?

7. Чем отличается МПА от МПЖ?

Домашнее задание:

1. Оформление отчета по лабораторному занятию.

2. Подготовиться к защите лабораторного занятия.

Лабораторная работа № 5

Для выделения, культивирования и идентификации микроорганизмов в лабораторных условиях используют различные искусственные питательные среды, которые в зависимости от назначения подразделяют на группы:

-обычные, или простые, - для выращивания большинства аэробов и факультативных анаэробов;

-специальные - для культивирования микробов, которые не растут или дают слабый рост на простых питательных средах;

-селективные - для выделения культур одною рода или вида, имеющих преимущество в размножении перед другими представителями микрофлоры;

-дифференциально-диагностические предназначенные для выявления культурально-биохимических особенностей бактерий,

-среды накопления (обогащения) - употребляемые для увеличения численности микробов, наличие которых в исследуемом материале незначительно, при подавлении роста посторонней микрофлоры.

Основой большинства питательных сред животного происхождения является мясная вода, для некоторых - печеночная вода.

Мясная вода. Свежую нежирную говядину или конину освобождают от костей, жира и сухожилий, пропускают через мясорубку или нарезают мелкими кусочками, заливают дистиллированной (водопроводной) водой в соотношении 1: 2 (на 500 г мяса 1000 см3 воды) и выдерживают 15 - 18 ч в прохладном месте. Затем настой кипятят в течение 40 мин - 1 ч и снимают накипь. После кипения мясную воду остужают для застывания жира, который легко при этом удаляется, фильтруют через ватно-марлевый фильтр до полной прозрачности, затем доливают дистиллированной (водопроводной) водой до первоначального объема, разливают в бутыли и стерилизуют в течение 20 мин при температуре 120 °С и давлении;

Печеночная вода. Свежую говяжью печень, освобожденную от жира пленок, Измельчают на мясорубке и заливают водопроводной водой из расчета 1: 2, настаивают в течение 1 ч и кипятят 30 мин при постоянно помешивании. После отстаивания фарш удаляют, доводят до первоначального объема дистиллированной водой и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Разлитую по колбам печеночную воду стерилизуют 30-40 мин при температуре 112 °С и давлении 0,05 МПа.

Основной раствор (перевар) Хоттингера. 1000 г мяса (говядины или конины), освобожденного от жира и сухожилий, нарезают кусками по 1-2 см, которые опускают небольшими порциями в кастрюлю с 2000 см3 кипящей водопроводной воды. Кипятят в течение 15-20 минут до свертывания белков (цвет мяса станет серым). Мясо вынимают шумовкой и пропускают через мясорубку, а оставшуюся жидкость фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 8,0. Затем фильтрат соединяют с фаршем, охлаждают до температуры 40 °С в открытой кастрюле и добавляют дважды измельченную поджелудочную железу, предварительно очищенную от жира, соединительной ткани, в количестве 10% к полученной взвеси (на 1000 см3 жидкости 100 г железы) или 0,9 -1,0 % сухого панкреатина (в зависимости от его активности).

Полученную смесь хорошо размешивают, после чего снова подщелачивают 10%-ным раствором гидроксида натрия или питьевой содой до pH 7,8-8,0. Смесь переливают в бутыли с хорошо подобранной резиновой пробкой на 2/3 их объема и добавляют на каждый литр смеси 10 см3 х. ч. хлороформа; закрывают бутыль пробкой и несколько раз встряхивают, после чего, открыв пробку, удаляют пары хлороформа, а бутыль снова закрывают.

Через 1-2 ч после добавления поджелудочной железы или панкреатина проверяют реакцию, устанавливают pH 7,4-7,6 и оставляют смесь для переваривания на 7 -16 сут при комнатной температуре до образования осадка. Первые 3-4 сут переваривания ежедневно встряхивают жидкость не менее трех раз в сутки, в дальнейшем встряхивать можно реже. За 1- 2 сут до окончания переваривания встряхивание прекращают, чтобы гидролизат отстоялся.

Можно ферментативное переваривание проводить в термостате при температуре 40-42 °С в течение 2 сут. Содержимое бутыли взбалтывают 2-3 раза в сутки с открыванием пробки. Конец переваривания характеризуется следующими признаками: жидкость над осадком просветляется и принимает соломенно-желтый цвет. Готовый перевар фильтруют через полотняный или бумажный фильтр, сливают в бутыль и стерилизуют в течение 30 мин при температуре 120 °С. Приготовленный гидролизат можно хранить пять месяцев. Перед употреблением жидкость вновь фильтруют.

Химические показатели готового перевара Хоттингера должны быть следующими: общего азота 900-1200 мг%, амииного азота 600- 750 мг%, триптофана 200-300 мг%

(Свободный триптофан можно обнаружить в качественной реакции, происходящей в кислой среде при взаимодействии его с препаратами хлора; с этой целью к 5 куб. см. питательной среды добавляют 2 капли уксусной кислоты, тщательно перемешивают и вносят несколько капель1%-го водного раствора хлорамина - появление розовой окраски свидетельствует о наличии триптофана.).

Пептонная вода. К 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 10-20 г пептона и 5 г хлорида натрия, кипятят 30 мин до растворения пептона, устанавливают pH 7,2-7,4, фильтруют через бумажный фильтр до полной прозрачности, после чего стерилизуют 30 мин при давлении 0,1 МПа и температуре 120 °С.

Пептонная вода может быть использована взамен мясо-пептонного бульона.

Мясо-пептонный бульон (МПБ) . К 1000 см3 мясной воды добавляют 10 г сухого пептона и 5 г хлорида натрия, кипятят в течение 30 мин, устанавливают необходимую реакцию, после чего добавляют воду до первоначального объема. Бульон фильтруют через бумажный фильтр, окончательно устанавливают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (питьевой соды) или 10 %-ным раствором гидроксида натрия требуемую реакцию, стерилизуют 15 -20 мин при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа.

Мясо-пептонный бульон предназначен для культивирования аэробных микроорганизмов и изучения показателей роста в жидкой питательной среде по помутнению среды, наличию и характеристике осадка, образованию пристеночного кольца, пленки.

Мясо-пептонный агар (МПА). К 1000 куб.см. мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного его растворения.

Мясо-пептонный агар, охлажденный до температуры 50-55 °С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 см3 мясо-пептонного агара), помещают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в кипящую водяную баню, чтобы белок свернулся. Горячий мясо-пептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают в нем pH 7,2-7,4, разливают в колбы или пробирки и 20 мин стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С.

Мясо-пептонный агар предназначен для культивирования аэробов и изучения характера роста микробов по величине и форме колоний, линии края, цвету, блеску, прозрачности, консистенции и некоторым другим признакам.

Полужидкий агар (ПЖА). К 1000 куб.см. мясо-пептонного бульона добавляют 3-4 г агара и на слабом огне расплавляют при постоянном помешивании, фильтруют через тканевый фильтр до полной прозрачности, разливают в пробирки по 5 см3 и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин.

Готовый полужидкий агар охлаждают столбиком, среда должна быть совершенно прозрачной.

Полужидкий агар используют для определения подвижности микроорганизмов. С этой целью посев тест-культур проводят уколом в столбик среды, не прокалывая до дна 5-6 мм: подвижные культуры дают диффузный рост и вызывают помутнение всей питательной среды, неподвижные - растут по уколу, среда остается прозрачной, штаммы, обладающие слабой подвижностью, дают помутнение отдельных участков агара обычно вблизи укола.

Питательный желатин (МПЖ). К 1000 см3 мясо-пептонного бульона прибавляют 100 г пищевого желатина высшего сорта. После набухания желатина в течение 1-2 ч растворяют при медленном нагревании на водяной бане при температуре 40 - 50 °С до полного расплавления. Устанавливают pH 7,2 10 %-ным раствором бикарбоната натрия, фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде. Если среда мутная, ее осветляют белком куриных яиц, после чего в горячем виде фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают в пробирки по 7 -8 см3, стерилизуют дробно 3 дня по 30 мин или однократно при температуре 110 °С и давлении 0,04 МПа в течение 30 мин. После стерилизации среду охлаждают столбиком.

Среда предназначена для определения протеолитической активности микробов по разжижению желатина. Являясь растворимым белком, полученным из нерастворимого коллагена, под влиянием фермента желатиназы подвергается гидролизу и теряет свои желирующие свойства, в результате при низких температурах остается жидким.

Бульон Хот ти нгера. К 1000 см3 основного раствора добавляют 500 см3 водопроводной или дистиллированной воды, 3 г хлорида натрия и 0,12 г двузамещенного фосфата калия. Полученный раствор кипятят в течение 15-20 мин, устанавливают pH 7,2-7,4 и фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, затем разливают в колбы или пробирки и стерилизуют в течение 20-30 мин при температуре 120°С и давлении 0,1 МПа.

В бульоне Хоттингера изучают характер роста микроорганизмов в жидкой питательной среде.

Среда Мартена. Свежие свиные желудки освобождают от жира и содержимого и пропускают через мясорубку. На 250 г фарша добавляют 1000 см3 теплой (50 °С) кипяченой водопроводной воды и 10 см3 концентрированной соляной кислоты. Смесь выдерживают при температуре 45-50 °С в течение 24 ч, периодически взбалтывая, затем прогревают текучим паром 30 мин и оставляют в холодном месте на 5 сут. Надосадочную жидкость сливают, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин. Полученный пептон Мартена хранят до 3 мес.

Из мяса крупного рогатого скота, освобожденного от жира и сухожилий, готовят фарш. К 500 г фарша добавляют 1000 см3 дистиллированной воды. Полученную смесь выдерживают при 4-8 °С в течение 24 ч, после чего кипятят на слабом огне 2 ч, постоянно подливая воду до первоначального объема. Фарш отжимают и удаляют, мясную воду фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30-40 мин. Готовую среду хранят при температуре 4-8 °С до 3 мес.

Для приготовления жидкой среды смешивают равные объемы пептона Мартена и мясной воды, устанавливают pH 8,0-8,2, разливают в колбы и стерилизуют при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин. Бульон хранят не более одного месяца.

Агар Мартена. В среду Мартена (бульон Мартена), подогретый до 50-60 °С, добавляют мелко нарезанный промытый агар-агар из расчета 25 г на 1000 см3, периодически помешивая, доводят жидкость до кипения для полного растворения агара. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр в горячем виде, разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин.

Бульон и агар Мартена предназначены для культивирования анаэробов и микоплазм.

• Питательные среды. Ч.2. Селективные дифференциально-диагностические среды для первичной идентификации энтеробактерий.

К 1000 мл мясопептонного бульона перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения.

Мясопептонный агар, охлажденный до температуры 50- - 55° С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 мл мясопептонного агара), по­мешают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в аппарат Коха на 1 ч чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горя­чий Мясопептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавли­вают в нем рН 7,0-7,4, разливают во флаконы или пробирки и 20 мин стерили­зуют в автоклаве при температуре 120° С.

Мясопептонный желатин

К мясопептонному бульону прибавляют мелко нарезанный желатин из расче­та ю-15 г на 100 мл. После набухания желатин растворяют при медленном нагревании в водяной бане при температуре 40-45 °С, устанавливают рН=7,0 10%-ным раствором бикарбоната натрия, фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде. Среду разливают в пробирки по 5-8 мл, стерилизуют дробно 3 дня по часу при температуре 100° С или однократно при 110° С в течение 20 мин. После стерилизации среду охлаждают.

Пептонная вода

К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия, кипятят до растворения пептона, фильтруют и устанавливают рН 7,2- 7,4, после чего стерилизуют 30 мин при температуре 120° С.

Элективные среды для выявления возбудителей пищевых то кс и ко инфекций Среды фуксин - сульфитный агар (среда Эндо), бакто-агар Плоскирева, ме-тилен-эозиновая среда Левина, висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера) го­товят из сухих стандартных сред по прописи, указанной на этикетке.

Среда Смирнова

К 1 л расплавленного МП А добавить 10-12 г лактозы и 4-5 мл 1,2% рас­твора бромкрезолпурпур. Стерилизовать дробно (или при 0,5 атм 20 мин).

Среды накопления сальмонелл Среда Мюллера Для приготовления среды Мюллера готовят вначале растворы серноватисто-кислого натрия и Люголя.

В мерный цилиндр с 50 г серноватистокислого натрия добавляют до 100 мл Дистиллированной воды. Раствор переливают в бутыль и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

Для приготовления среды Мюллера в стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела и стерилизуют их сухим паром в течение 1 ч. Затем наливают в каждый флакон по 90 мл бульона из перевара Хоттингера, содержащего 130- 150 мг % азота, устанавливают рН 7,2-7,4 и стерилизуют 30 мин при температуре

120°С После стерилизации вновь устанавливают рН 7,2-7,4, для чего прове­ряют в одном из флаконов и определяют необходимый для подтитровки дан­ного количества среды объем соляной кислоты или гидрата окиси натрия. Затем в асептических условиях перед употреблением добавляют по 2 мл раствора Лю-голя и по 10 мл раствора серноватистокислого натрия.

Таблица 1 Рост возбудителей пищевых токсикоинфекций на элективных средах и МПА

ГОСТ 20730-75

Группа Р35

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)

Технические условия

Nutrient media. Meat-pepton broth (for veterinary). Specifications*

______________
* Наименование стандарта. Измененная редакция, Изм. N 1 .
 

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. N 899 срок действия установлен с 01.01.1976 г. до 01.01.1981 г.*
________________
* Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС N 4, 1994 год). - Примечание изготовителя базы данных.

ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 1975 г.

ВНЕСЕНО Изменение N 1 , утвержденное и введенное в действие с 01.01.90 Постановлением Госстандарта СССР от 28.06.89 N 2194

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 11, 1989 год


Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Мясопептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующим технологическим регламентом из мясной воды по ГОСТ 20729-75 с добавлением 1% пептона и 0,5% хлорида натрия в разведениях 1:1, 1:2 и 1:4.

1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.

Таблица 1

1.1, 1.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.

2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.

2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л - 0,6 л.

Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.

2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.

2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Методы отбора проб

3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.

Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 см. Пять флаконов используют для анализа, а пять - оставляют в архиве государственного контролера.

Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.

3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически.

3.4. Определение содержания общего азота

3.4.1. Аппаратура и реактивы



весы аналитические;

колбу Кьельдаля вместимостью 50-100 см по ГОСТ 25336-82 ;

аппарат микро-Кьельдаль;

элемент нагрева (плитку, горелку);

пипетки на 1, 2, 5 см по ГОСТ 20292-74 ;

бюретки по ГОСТ 20292-74 ;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 ;

кислоту серную по ГОСТ 4204-77 , концентрированную и 0,1 н раствор;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 30-33%-ный и 0,1 н растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;

перекись водорода по ГОСТ 10929-76 ;

метиловый красный;

метиленовую синь;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67 ;

метиловый оранжевый, 0,1%-ный раствор.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.4.2. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 1 см помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 см концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора - перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 см через каждые 15-20 мин до полного обесцвечивания раствора.

После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10-12 см дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.

В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 см 0,1 н раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 см 96%-ного этилового спирта.

Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30-33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 см раствора.

Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации берут 1 см дистиллированной воды.

3.4.3. Обработка результатов

Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - количество 0,1 н раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н серной кислоты;

- количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, см;


- количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см;

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 см 0,1 н раствора серной кислоты, г.

За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±0,5%.

3.4.2, 3.4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5. Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов

3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82 ;

пипетки, бюретки по ГОСТ 20292-74 ;

формалин технический по ГОСТ 1625-75 ;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 0,1 н раствор;

фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5.2. Подготовка к испытанию

Непосредственно перед проведением анализа готовят формольную смесь. Для этого к 50 см формалина добавляют 1 см 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.

3.5.3. Проведение испытания

К 2 см мясо-пептонного бульона приливают 18 см дистиллированной воды и доводят 0,1 н раствором гидрата окиси натрия рН смеси до 7,0. Затем приливают 2 см формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до рН 9,2.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 см мясо-пептонного бульона берут 2 см дистиллированной воды.

3.5.4. Обработка результатов

Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, см;

- количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора гидрата окиси натрия;

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 см 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, г;

2 - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.

3.5.2-3.5.4. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6. Определение содержания пептонов

3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр или спектрофотометр;

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

пробирки по ГОСТ 25336-82 ;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 10%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-78 , 2%-ный раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 ;

центрифуги настольные типа ОПН-8-14,2.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.2. Подготовка к испытанию

3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах, по оси ординат - оптическую плотность () согласно данным, приведенным в табл.2.

Таблица 2

3.6.3. Проведение испытания

В пробирку наливают 10 см мясо-пептонного бульона в разведении 1:10, прибавляют по 1 см 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.

Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 см разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 см дистиллированной воды.

Через 2 мин смесь центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000-4000. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540-560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.4. Обработка результатов

Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяют по градуировочному графику.

Оптическая плотность () мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т.е. на разведение мясо-пептонного бульона).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.

3.7. Определение содержания сухого вещества

3.7.1. Аппаратура

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

шкаф сушильный лабораторный;

эксикаторы по ГОСТ 25336-82 ;

стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 25336-82 ;

пипетки по ГОСТ 20292-74 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.7.2. Проведение испытания

В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0-1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.

Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.

3.7.3. Обработка результатов

Содержание сухого вещества в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - масса пустой бюксы с крышкой, г;

- масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;

- масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном после высушивания, г;

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.

3.8. Определение содержания бeлка (по методу Лоури)

3.8.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82 ;

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

фильтры бумажные;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 0,1 н. раствор;

натрий углекислый по ГОСТ 84-76 ;

натрий виннокислый или калий виннокислый двузамещенный, 1%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-78 ;

натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289-78 ;

натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931-74 ;

кислоту ортофосфорную 85%-ную;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-67 *;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 3118-77 . - Примечание изготовителя базы данных.

литий сернокислый;

бром по ГОСТ 4109-79 ;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.8.2. Подготовка к испытанию

Приготовление реактива А

Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива В

Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 1%-ного раствора двузамещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива С

Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В.

Приготовление реактива Д

Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.

В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 см дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 см 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 см концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы осторожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.

После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 см дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1:10 (1 см реактива и 9 см воды) и титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3-4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованного на титрование 1 см реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6-2,3 Н.

Приготовление реактива Е

Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н раствором кислоты, то для приготовления 1 н раствора Е надо брать 10 см реактива Д и 13 см дистиллированной воды.

Построение градуировочного графика для определения белка

Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п.3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды. Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).

Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по величине оптической плотности лежало в пределах 0,2-0,8, где точность измерения наиболее высокая.

3.8.3. Проведение испытания

В пробирку наливают 1 см разведенного 1:10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 см реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 см реактива Е. Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 см дистиллированной воды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30-40 мин.

Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630-640 нм) против воды в 5-миллиметровых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помощью градуировочного графика определяют содержание белка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.

3.8.2, 3.8.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9. Определение содержания хлорида натрия

3.9.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

элемент нагрева (горелку, плитку);

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

бюретки по ГОСТ 20292-74 ;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82 ;

квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205-77 , насыщенный раствор;

калий роданистый по ГОСТ 4139-75 или аммоний роданистый, 0,1 н раствор;

кислоту азотную по ГОСТ 4461-77 , концентрированную;

серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-75 , 0,1 н раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9.2. Проведение испытания

2 см мясопептонного бульона помещают в стакан, добавляют 20 см воды, 1 см концентрированной азотной кислоты и 10 см 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.

Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 см насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.

3.9.3. Обработка результатов

Содержание хлорида натрия в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - количество 0,1 н раствора азотнокислого серебра, взятое в стакан с пробой, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора азотнокислого серебра;

- количество 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония);

0,005844 - количество хлорида натрия, соответствующее 1 см 0,1 н раствора азотнокислого серебра;

- количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,01%.

3.9.2, 3.9.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10. Определение концентрации водородных ионов (рН)

3.10.1. Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82 ;

воронки стеклянные;

фильтры бумажные.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10.2. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют рН по инструкции, приложенной к рН-метру.

3.11. Определение стерильности

3.11.1. Аппаратура, материалы, реактивы

Для проведения испытания применяют:

термостат с температурой нагрева 37-38 °С;
фильтры бумажные; в пробирки, закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см.

3.11.3. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре. Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 см в четыре флакона вместимостью 200 см. Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6-8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 см испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37-38 °С. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.

3.11.2, 3.11.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11.4. Обработка результатов

При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.

При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов и пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.

3.12. Определение способности поддерживать рост микробов

3.12.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы технические;

термостат;

автоклав;

рН-метр;

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

бюретки по

3.12.2. Подготовка к испытанию

Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают рН среды 7,4.

Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8-10 см в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.12.3. Проведение испытания

Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus "Лассманов", Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л.А.Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37-38 °С.

Рост культуры должен быть типичным и обильным.

3.12.4. Обработка результатов

Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.

Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ - визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620-640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.

4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

______________
* Наименование раздела. Измененная редакция, Изм. N 1 .

4.1. Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 л. Допускается более мелкая расфасовка - флаконы вместимостью 200 и 500 см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.3. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:

наименования препарата;

количества препарата, л;

номера серии препарата;

даты изготовления;

срока годности;

условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

4.4. Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4-10 °C.

4.5. Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п.4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18 °С, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.
.

ГОСТ 10394-72 введен взамен ГОСТ 10394-63 .

ГОСТ 10515-75 введен взамен ГОСТ 10515-63 .

ГОСТ 10931-74 введен взамен ГОСТ 10931-64 .

Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1976